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(2)吸管:洗凈、烘干后的吸管,在吸口的一頭塞入少許脫脂棉花,以防在使用時(shí)造成污染。塞入的棉花量要適宜,多余的棉花可用酒精燈火焰燒掉。每支吸管用一條寬約4~5cm的紙條,以30~50℃的角度螺旋形卷起來,吸管的高等在頭部,另一端用剩余的紙條打成一結(jié),以防散開,標(biāo)上容量,若干支吸管包扎成一束進(jìn)行滅菌。使用時(shí),從吸管中間擰斷紙條,抽出試管。
?。?)試管和三角瓶:試管和三角瓶都需要做合適的棉塞,棉塞可起過濾作用,避免空氣中的微生物進(jìn)入容器。制作棉塞時(shí),要求棉花緊貼玻璃壁,沒有皺紋和縫隙,松緊適宜。過緊易擠破管口和不易塞入;過松易掉落和污染。棉塞的長度不小于管口直徑的2倍,約2/3塞進(jìn)管口。
目前,國內(nèi)已開始采用塑料試管塞,可根據(jù)所用的試管的規(guī)格和試驗(yàn)要求來選擇和采用合適的塑料試管塞。
若干支試管用繩扎在一起,在棉花部分外包裹油紙或牛皮紙,再用繩扎緊。三角瓶加棉塞后單個(gè)用油紙包扎。
?。ㄋ模?、玻璃器材的滅菌
滅菌:干熱滅菌:160~165℃烘箱中滅菌2h;或濕熱滅菌:121℃20~30min
u干熱滅菌法
1、將包扎好的玻璃器皿擺入電熱烘箱中,相互間要留有一定的空隙,以便空氣流通。
2、關(guān)緊箱門,打開排氣孔,接上電源。
3、待箱內(nèi)空氣排出到一定程度時(shí),關(guān)閉上排氣孔,加熱至滅菌溫度后,固定溫度進(jìn)行滅菌:160℃—165℃保持2小時(shí)。2小時(shí)后切斷電源。
4、待烘箱內(nèi)溫度自然降溫冷卻到60℃以下后,再開門取出玻璃器皿,避免由于溫度突然下降而引起玻璃器皿碎裂。
高壓蒸汽滅菌法
1、關(guān)好排水閥門,放入純凈水或蒸餾水至標(biāo)度。注意水量一定要加足,否則容易造成事故。
2、將須要滅菌的器材、培養(yǎng)基等裝入滅菌鍋中,加蓋密封。旋緊螺旋時(shí),先將每個(gè)螺旋旋轉(zhuǎn)到一定程度(不要太緊),然后再旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺旋,以達(dá)到平衡旋緊,否則易造成漏氣,達(dá)不到完全滅菌的目的。
3、通電加溫,打開排氣活門,排盡鍋內(nèi)的空氣。通常當(dāng)壓力表指針升至5磅或0.05MPa時(shí),打開排氣活門放氣,待壓力表指針降至零點(diǎn)一小段時(shí)間后,再關(guān)閉活門。即活門沖出的全部是蒸汽時(shí)則表示完全,此時(shí)可關(guān)閉排氣活門,如果過早關(guān)閉活門,排氣不完全,也達(dá)不到完全滅菌的目的。
4、恒溫滅菌:0.1MPa或15磅壓力保持20~30分鐘。壓力表的指針上升時(shí),鍋內(nèi)溫度也逐漸升高,當(dāng)壓力表指針升至0.1MPa時(shí)或15磅時(shí),鍋內(nèi)溫度相當(dāng)于120℃~121℃(等于一個(gè)大氣壓),此時(shí)開始計(jì)算滅菌時(shí)間,控制熱源,使處于0.1MPa或15磅壓力保持20~30分鐘,即能達(dá)到完全滅菌的目的,然后停止加溫。當(dāng)達(dá)到所需溫度時(shí)開始計(jì)時(shí),并在此溫度下保持所需的時(shí)間。
5、降溫:自然降溫或打開活門排汽降溫。稍微打開一點(diǎn)排氣活門,使鍋內(nèi)蒸汽緩慢排除,然后逐漸開大活門,氣壓徐徐下降,注意勿使排氣過快,否則會(huì)使鍋內(nèi)的培養(yǎng)基沸騰而沖脫或沾染棉花塞,但排氣太慢又使培養(yǎng)基在鍋內(nèi),受高溫處理時(shí)間過長,對(duì)培養(yǎng)基也是不利的。一般從排氣到打開鍋蓋以10分鐘左右為好。
6、當(dāng)鍋內(nèi)蒸汽完全排盡時(shí)即壓力表指針降到零時(shí),要立即打開鍋蓋。
7、取出滅菌物品:當(dāng)鍋內(nèi)溫度下降到60℃左右時(shí)器材或培養(yǎng)基。如培養(yǎng)基需制備固體斜面培養(yǎng)基時(shí),則應(yīng)趁熱將試管斜放在桌上,上面蓋上報(bào)紙以免落灰塵,冷卻后便可收起。
8、較后將高壓滅菌器內(nèi)的剩余水排出。
9、觀察滅菌效果。把滅菌培養(yǎng)基放入25℃溫箱中,培養(yǎng)48小時(shí)觀察滅菌效果。48小時(shí)后不見雜菌生出,便證明培養(yǎng)基已達(dá)到滅菌目的,可以使用。
五、思考題
1、干熱滅菌和高壓蒸汽法適用范圍如何?
2、電熱烘箱和高壓鍋如何操作?各有哪些使用注意事項(xiàng)?
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